全反式视黄酸诱导人视网膜色素上皮细胞凋亡的实验研究

摘要

目的 探讨梯度浓度全反式视黄酸(all-trans retinoic acid,ATRA)诱导人视网膜色素上皮细胞凋亡的作用.方法 采用流式细胞术检测视网膜色素上皮细胞凋亡、活性氧(ROS)活性.采用实时定量聚合酶链反应和Western blot,从蛋白水平检测梯度浓度ATRA对ARPE-19细胞内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)标记蛋白表达的影响.观察抗氧化剂NAC及ERS抑制剂Salubrinal抑制ARPE-19细胞诱导ROS和ERS的作用.结果 CCK-8检测结果显示:ATRA处理ARPE-19细胞24 h和48 h后的半抑制浓度(IC50)分别为13.88μmol·L-1和11.99μmol·L-1.流式细胞术检测结果显示,10.0μmol·L-1、15.0μmol·L-1、20.0μmol·L-1 ATRA处理后细胞凋亡水平均较对照组显著上升,差异均有统计学意义(均为P<0.001);2.5μmol·L-1、5.0μmol·L-1、10.0μmol·L-1、20.0μmol·L-1 ATRA处理后细胞的ROS水平均较对照组显著增加,差异均有统计学意义(均为P<0.001).Western blot检测结果显示,ERS标记蛋白C/EBP同源蛋白(C/EBPhomologous protein,CHOP)、结合免疫球蛋白(binding immunoglobulin protein,BIP)的蛋白表达水平与对照组差异均有统计学意义(均为P<0.05);经ATRA处理的模型组较对照组的血管内皮生长因子A(VEGF-A)、CHOP蛋白表达水平均显著上升,NAC-ARTA处理组、Salubrinal-ARTA处理组及NAC-Salubrinal-ARTA联合处理组较模型组的VEGF-A、CHOP蛋白表达水平均显著下降,差异均有统计学意义(均为P<0.05).结论 ATRA通过激活ROS和ERS信号通路诱导ARPE-19细胞凋亡.