酶-机械分离-酶消化法分离培养兔眼虹膜色素上皮细胞

摘要

目的建立兔眼虹膜色素上皮细胞体外培养体系.方法采用酶-机械分离-酶消化法分离兔眼IPE细胞,台盼蓝染色法测定细胞活力,在体外对其进行原代及传代培养扩增,倒置相差显微镜观察IPE细胞的生长情况.取第2次传代的IPE细胞行AE1/AE3及S-100抗体细胞免疫组化染色对其进行鉴定.结果酶-机械分离-酶消化法分离得到IPE细胞的活力为70%～85%.原代细胞16～48h贴壁,72h后开始生长,细胞大多呈多角形或方形,少数为梭形,12～16d生长融合为单层细胞.第1次传代的IPE细胞6～12h贴壁,5～7d生长融合为细胞单层.IPE细胞在体外培养可传5～6代.免疫组化染色显示,几乎所有细胞胞浆呈现棕黄色阳性反应,对照组胞浆不染色.结论酶-机械分离-酶消化法分离培养兔眼IPE细胞易于操作,联合应用细胞角蛋白、S-100蛋白单克隆抗体的免疫组化技术可用来鉴定IPE细胞.