兔眼与猪眼视网膜色素上皮细胞分离及培养方法的对比

摘要

目的分别对兔眼及猪眼视网膜色素上皮（RPE）细胞进行体外分离、培养和鉴定，探讨二者的异同点及注意事项。方法对有色兔眼和猪眼的RPE细胞采用胰蛋白酶消化法进行分离、培养和传代，取第4代细胞用于实验。免疫细胞化学染色对传代的细胞进行鉴定。光学显微镜下观察并比较培养的2种动物来源RPE细胞的形态、特征，并对2种动物来源的RPE细胞的培养过程进行比较。结果2种动物来源的RPE细胞分离方法的不同与各自眼球的解剖结构相关，主要体现在消化过程，猪眼RPE细胞1次消化即可分离，兔眼RPE细胞需2次消化得到。原代猪眼RPE细胞24h内贴壁较兔眼48～72h贴壁时间早。培养早期细胞生长活跃，随传代次数增加活力下降，色素颗粒减少。免疫细胞化学染色提示细胞角蛋白（AE1／AE3）表达阳性。结论2种动物来源的RPE细胞均可通过胰蛋白酶消化法分离，获得的RPE细胞数量多，培养成功率高。猪眼RPE细胞的分离培养更为容易。4代以内的RPE细胞适合于实验研究。