改良人视网膜微血管内皮细胞原代培养及鉴定

摘要

目的建立人视网膜微血管内皮细胞的改良培养方法并研究其体外免疫组化特征.方法由人微血管片断生长出的内皮细胞首先通过CD31+免疫磁珠标记,于明胶包被培养瓶接种,采用含有20 mg·L-1内皮细胞生长因子、90 mg·L-1肝素、150 mL·L-1马血清和100 mL·L-1人血清的内皮细胞基本培养基;非内皮细胞例如周细胞可机械除杂,保留的内皮细胞克隆特征性的标志物为CD31+磁珠标记;特征通过免疫组化和激光共聚焦显微镜评价.人视网膜微血管内皮细胞的生长曲线通过MTT法测定.结果在这样的培养条件下,内皮细胞1～2 d由微血管片断游出,1周可形成较大克隆,大约2周可融合成单层细胞.这些细胞证实可被CD31+磁珠附着,表达von Willebrand因子、细胞粘附蛋白CD31与CD34,并不表达α-平滑肌肌动蛋白.内皮细胞可部分混杂其他细胞,持续生长并传代.结论本研究为采用磁珠鉴定人源性视网膜微血管内皮细胞的培养及鉴定的新改良方法.本培养实验为研究人眼异常血管疾病提供了新的平台.