原代SD大鼠视网膜微血管内皮细胞的培养及鉴定

摘要

目的探讨大鼠视网膜微血管内皮细胞的体外分离培养方法。方法选取6~8周龄SD大鼠5只,摘取眼球,挤压球壁后,人工剥离视网膜。将大鼠视网膜剪碎,依次经过200μm、75μm不锈钢筛网;收集滤液,离心,弃上清,予0.1%II型胶原酶消化15~20min;再次将消化液通过45μm尼龙筛网,反复冲洗筛网,收集网上物;添加培养液,接种于Nunc进口培养皿中。通过细胞形态学观察、VIII因子相关抗原免疫细胞化学染色鉴定所培养的细胞。结果接种48h后,微血管内皮细胞从血管组织碎片爬出,单个细胞形态为多角形或短梭形,细胞间隙较大,细胞核清晰,胞质丰富;96h后细胞融合,呈典型的单层、扁平、铺路石样镶嵌式排列。细胞Ⅷ因子相关抗原免疫细胞化学染色检测,免疫反应阳性细胞率达98%以上。结论连续物理过筛法结合胶原酶消化法能够成功、高效地分离出原代大鼠视网膜微血管内皮细胞,为视网膜血管疾病的体外基础研究提供有效的细胞模型。