黄芪多糖对过氧化氢诱导人视网膜色素上皮细胞氧化损伤的保护作用

摘要

目的 观察黄芪多糖(astragalus polysaccharide,APS)对过氧化氢诱导的人视网膜色素上皮细胞(retinal pigment epithelium,RPE)氧化损伤的保护作用.方法 培养的人RPE细胞系ARPE-19分为正常对照组、过氧化氢损伤组和不同浓度(1000 mg· L-1、500mg·L-1)APS干预组,正常对照组不作任何处理,过氧化氢损伤组加入200 μmol·L-1过氧化氢,APS干预组加入不同浓度(1000 mg·L-1、500 mg·L-1) APS后加入200 μmol·L-1过氧化氢.用倒置荧光显微镜观察各组细胞形态变化;MTT检测各组细胞活性;DAPI染色观察各组细胞核形态学变化;实时细胞电子分析系统(real-time cell electronic sensing system,RT-CES)实时记录细胞生长状态;应用caspase-3活性检测试剂盒测定各组细胞中caspase-3的活性.结果 过氧化氢损伤组细胞皱缩,悬浮细胞增多,APS干预后细胞状态改善.MTT检测结果显示:1000 mg·L-1、500mg· L-1 APS孵育24 h后细胞存活率分别为(99.86±3.64)％和(101.03 ±3.52)％,与正常对照组(100％)相比,差异均无统计学意义(均为P＞0.05),过氧化氢损伤组细胞存活率为(56.49±2.30)％,与正常对照组相比显著降低(P＜0.01),1000 mg·L-1、500mg· L-1 APS干预后,细胞存活率升高到(88.14±2.97)％和(80.75±3.13)％,与过氧化氢损伤组相比差异均有显著统计学意义(均为P＜0.01).DAPI染色显示正常细胞核均匀淡染,过氧化氢损伤组出现强荧光点和致密的细胞核,APS处理后凋亡程度减轻.RT-CES显示,APS处理可以减少过氧化氢造成的细胞损伤.Caspase-3检测发现过氧化氢造成细胞caspase-3水平升高,APS处理后caspase-3水平下降.结论 APS可以抑制过氧化氢诱导的人RPE细胞系ARPE-19的凋亡,这为APS的临床应用提供了一定的实验基础.