流行性腹泻病毒M基因与甲病毒载体重组RNA的构建

摘要

将猪流行性腹泻病毒(PEDV)的M基因导入甲病毒载体(plasmid Semliki Forest Viru,pSFV) ,研究该基因及其编码蛋白的表达.首先将扩增的病毒M基因导入pSFV 的SP6启动子下游.用Spe Ⅰ酶将pSFV- M重组质粒DNA线性化,再将其体外转录成5′末端含帽子结构的重组RNA.然后通过电穿孔法将此重组RNA转染BHK-21细胞,收集病毒样粒子用于感染BHK-21细胞.采用细胞免疫化学的方法对转染和感染细胞的表达产物进行分析.pSFV-M RNA转染和病毒粒子感染哺乳动物细胞表达的M蛋白,可与PEDV多克隆抗体起特异反应,证明体外转录的重组RNA 含有PEDV M的特异序列.