O型口蹄疫病毒VP1基因的原核表达及间接ELISA检测方法的建立

摘要

表达O型口蹄疫病毒VP1蛋白,用于O型口蹄疫病毒的检测.以质粒T234/FMDV为模板,PCR扩增VP1基因片段,构建重组质粒pET-41b/VP1,转化表达菌BL21(DE3),IPTG诱导,SDS-PAGE凝胶电泳和Western blot进行分析检测,目的蛋白经镍离子亲和层析纯化,以纯化的目的蛋白包被,建立了间接VP1-ELISA检测方法.VP1基因表达的蛋白主要以包涵体形式存在,复性后具有免疫反应性,方阵滴定法确定了包被抗原的最佳工作浓度(1 mg/L),最佳的酶结合稀释度为1:8 000,检测结果特异性好.O型口蹄疫病毒VPl基因可在表达载体pET-41b中表达,并建立了O型口蹄疫病毒检测方法.