超排兔卵巢卵母细胞直接用于体细胞核移植的研究

摘要

为了评估兔超排后卵巢残留卵泡内卵母细胞用作体细胞核移植的潜力,应用PMSG或FSH诱导母兔超排,排卵结束(hCG注射14 h)后,抽吸卵巢表面卵泡回收卵母细胞(抽吸组/处理组)用于体细胞核移植(SCNT),同时与自然排卵到输卵管内的卵母细胞(排出组/对照组)进行比较.结果表明,PMSG和FSH超排获得的抽吸组成熟卵母细胞(以可见第一极体为准)的比率分别极显著和显著低于各自的排出组(PMSG:70.7％vs94.6％,P＜0.01;FSH:81.5％vs94.6％,P＜0.05),且PMSG和FSH抽吸组间卵母细胞的成熟率差异显著(70.7％ vs 81.5％,P＜0.05).PMSG和hCG超排的抽吸组成熟卵母细胞的去核效率也显著低于各自的排出组(PMSG:抽吸Vs排出=69.2％vs83.6％,P＜0.05;FSH:抽吸Vs排出=71.6％vs81.0％,P＜0.05).抽吸组成熟的卵母细胞注核效率以及此类卵母细胞用作胞质受体经体细胞移植后的重构胚在融合率、分裂率以及分裂胚胎发育至囊胚的比例与排出组差异均不显著(P＞0.05).另外,抽吸组卵母细胞孤雌激活后胚胎的发育能力以及囊胚细胞总数与排出组差异也不显著(P＞0.05).但是,PMSG超排后的抽吸组成熟卵母细胞体细胞核移植的总体效率显著低于相应的排出组(8.4％vs11.5％,P＜0.05),而FSH超排的卵母细胞抽吸组与排出组差异则不显著(10.2％vs11.6％,P＞0.05).结果显示,抽吸自超排兔卵巢表面卵泡内的卵母细胞大多数都已经成熟,虽然去核效果要差些,但获得的重构胚与源自排出到输卵管内的卵母细胞的重构胚具有等同的发育能力,可以不经体外成熟培养而直接用于体细胞核移植,而且FSH超排获得的抽吸组卵母细胞体细胞核移植的总体效率与自然排卵到输卵管内的卵母细胞没有显著差别.