猪戊型肝炎病毒ORF3基因的克隆与原核表达

摘要

为了表达猪源戊型肝炎病毒衣壳蛋白,并对其反应原性进行研究,采用RT-PCR方法扩增猪戊型肝炎病毒(SHEV) ORF3完整基因,将扩增产物插入pMD19-T载体,再亚克隆至原核表达载体pET-32a(+),构建了pET-32a(+)-ORF3表达载体,转入E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,同时对诱导表达条件进行筛选,并用SDS-PAGE和免疫印迹等方法分析鉴定表达产物.结果表明,成功扩增到345 bp的目的基因片段,表达载体pET-32a(+)-ORF3转入E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导,成功表达了ORF3基因编码的蛋白,当IPTG浓度为1 mmol/L,诱导时间为6h时,该基因在E.coli BL21 (DE3)中表达量最高.表达产物的分子质量约为29.6 ku,与预期目的蛋白分子质量相符.表达的蛋白既有包涵体形式,也有可溶性形式.经Western blot检测,表达的目的蛋白能与SHEV阳性血清发生特异性反应.