奶牛源金黄色葡萄球菌的分离鉴定及氟苯尼考耐药基因fexA的克隆

摘要

从100个奶牛场环境及脓汁样品中分离、鉴定了9株奶牛源耐氟苯尼考金黄色葡萄球菌,分别提取质粒DNA和基因组DNA,通过特异性引物进行PCR扩增氟苯尼考耐药基因fexA,以质粒DNA为模板的PCR分别扩增出了1446 bp特异性目的片段,而以基因组DNA为模板的PCR未扩增出该目的片段.将该目的片段克隆到pET-32(a)载体上,成功构建了pET-fexA质粒载体,将质粒载体转入BL21中,药物敏感性试验显示构建的pET-fexA/BL21基因工程菌对氯霉素和氟苯尼考高度耐药.同时,fexA阳性金黄色葡萄球菌分离株对氯霉素和氟苯尼考的耐药性显著高于质控菌株,说明fexA基因贡献细菌对氯霉素和氟苯尼考的交叉耐药.成功构建了一个基因背景清楚且对氟苯尼考耐药的细菌模型,排除了细菌中其他氟苯尼考耐药基因或泵出蛋白对fexA基因贡献细菌耐药的影响,为fexA基因编码的蛋白定位研究奠定了基础.