猪流产衣原体实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用

摘要

为建立一种快速、准确检测猪流产衣原体(Chlamydophila abortus,C.abortus)实时荧光定量PCR检测方法,根据C.abortus主要外膜蛋白(MOMP)的基因序列设计1对引物和1条分子探针(FAM和Dabycl标记),以构建的重组质粒作为标准阳性质粒,通过筛选和条件优化,建立了猪流产衣原体实时荧光定量PCR诊断方法.重复性、特异性及敏感性试验结果显示,重组质粒为标准品建立的标准曲线在1.0×102拷贝/μL～1.0×107拷贝/μL内具有良好的线性关系,其相关系数为0.9932,扩增效率为94.7％,灵敏度达到1.0拷贝/μL,批间批内变异系数(CV)为0.022％～0.051％,建立的方法可有效区分流产衣原体、猪支原体、猪衣原体、肺炎衣原体及猪蓝耳病毒等病原,具有良好的临床应用前景.