慢病毒介导的GFP转染对大鼠骨髓间充质干细胞增殖、细胞表型及脑脊液诱导后分化能力的影响

摘要

目的:研究慢病毒(Lentivirus)介导的绿色荧光蛋白(Lentivirus-GFP)转染大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)的可行性及稳定性,以及对人脑脊液诱导转染后BMSCs(BMSCs-GFP)成神经分化能力的影响.方法:全骨髓贴壁法培养BMSCs,Lentivirus-GFP以5、10、30、50的感染复数(MOI)转染BMSCs,96h后倒置显微镜下观察GFP转染效率和表达情况,筛选最适MOI;流式细胞术检测细胞表型;CCK8法检测细胞活力.人脑脊液诱导BMSCs-GFP向神经细胞分化,蛋白印迹法检测神经细胞表面标记物MAP-2和Nestin表达.结果:全骨髓贴壁法分离培养的BMSCs生长旺盛.MOI值为5、10、30、50的转染效率分别为56.2％、87.3％、94.7％和95.1％,当MOI为30时,Lentivirus-GFP转染BMSCs效率较高,且对BMSCs生长状态无显著性影响.BMSCs-GFP表达CD29、CD90,较少表达CD45、CD54,符合干细胞特性.BMSCs-GFP增殖活性与未转染GFP基因的BMSCs相比,差异无统计学意义(P＞0.05).人脑脊液诱导BMSCs-GFP成神经细胞分化后表达神经元标记物MAP-2和Nestin.结论:Lentivirus-GFP能高效稳定转染大鼠BMSCs(最适MOI值为30),同时不影响其生物学特性,人脑脊液能诱导BMSCs-GFP成神经细胞分化.