栉孔扇贝鳃细胞原代培养与BαP细胞毒性检测技术的研究

摘要

本研究优化了栉孔扇贝(Chlamys farreri)鳃细胞制备方法和原代培养条件,采用3种细胞活性检测技术,比较分析了苯并(a)芘(B[α]P)对栉孔扇贝鳃细胞的毒性作用.结果显示,栉孔扇贝鳃组织在1％青霉素–链霉素(双抗)和庆大霉素消毒10～30 min内,原代培养鳃细胞存活率无明显差异.消毒30 min时,镜检无染菌现象,细胞状态良好.胰蛋白酶消化时间对鳃细胞收获量影响显著,在消化15～25 min内,鳃细胞存活率较高,胰蛋白酶的最佳消化时间为25 min.在150～300 g相对离心力作用下,鳃细胞形态和存活率存在明显差异,在150 g时,存活率和细胞完整性较好.添加胎牛血清(5％～20％)在6～12 h内鳃细胞存活率无显著变化,培养24 h时,5％和20％处理组存活率显著下降,10％和15％处理组存活率无明显变化.台盼蓝拒染法细胞活性检测表明,B[α]P对栉孔扇贝鳃细胞活性无明显影响;CCK8试剂法得出,仅在16μg/mL最高浓度下,鳃细胞活性受到显著抑制;而中性红比色法显示,鳃细胞毒性作用与B[α]P浓度、染毒时间呈正相关性.研究表明,栉孔扇贝鳃细胞最佳制备方法:消毒30 min、胰蛋白酶消化25 min、相对离心力为150 g、原代培养基添加10％胎牛血清为最佳.同时,中性红比色法可以作为评价B[α]P对栉孔扇贝鳃细胞毒性的敏感指标.