单卵RT-PCR方法的优化和对牛卵母细胞中发育相关基因的表达研究

摘要

到目前为止,虽然许多动物如羊、牛、猪、鼠、兔、马、骡等均已克隆成功,但克隆技术普遍存在着克隆效率低、流产率高、畸胎、巨胎和死亡率高等问题.为了较全面地探索其基因方面的原因,需要对大量的候选基因进行分析.而利用传统的RT-PCR方法从单个卵母细胞或胚胎中获得的RNA量不足以分析大量的基因.为了解决这一问题,利用并优化了一套全新的扩增细胞中整体cDNA的方法,使微量材料进行大量的基因表达分析成为现实.通过该方法研究了与发育相关的重要基因IL6、IFτ、CX43、PSMC3、oct4和DNMT1在牛卵母细胞中的表达.IL6、IFτ和CX43的表达与前人报告的结果相同,而DNMT1和PSMC3在牛卵母细胞中表达情况此前未见报道.