人肝癌巴马小型猪异种移植模型的建立

摘要

目的 建立人肝癌巴马小型猪异种移植模型,探索人肝癌细胞是否能在猪的肝脏中存活,为建立人肿瘤细胞异种移植的大动物模型和临床肿瘤治疗、药物试验等研究奠定实验基础.方法 将表达GFP的人肝癌细胞通过腹腔镜手术注入15只肝部分切除的巴马小型猪的肝实质中.实验分为3组(G0组、G1组和G2组).G0组为对照组,巴马小型猪肝脏实行肝部分切除术后注射生理盐水;G1组巴马小型猪实施肝部分切除术后注射人肝癌细胞;G2组巴马小型猪实施肝部分切除术后注射人肝癌细胞,术后12小时饲喂免疫抑制剂.定期采集各组实验动物的外周血,检测实验动物天冬氨酸转氨酶(AST)和丙氨酸转氨酶(ALT)的变化,检测血清中是否存在人类甲胎蛋白(AFP).对巴马小型猪的肝脏进行取材,苏木素-伊红(HE)染色后镜下观察猪肝组织病理学特征.对实验组进行绿色荧光蛋白(GFP)免疫组织化学染色,检测组织中是否有人肝癌细胞的嵌合.结果 各组巴马小型猪的AST和ALT指标在术后14天恢复到术前水平.GFP免疫组织化学结果显示在G1组和G2组巴马小型猪的肝脏中均能检测到人肝癌细胞.酶联免疫吸附试验(ELISA)检测结果显示在实验组的外周血中可以检测到人AFP的表达,且G2组与G1组相比,差异具有统计学意义〔AFP(μg/L):39.54±20.30比13.77±7.52,P<0.05〕.HE染色结果显示G1组肝组织出现淋巴细胞浸润和肝细胞坏死.结论 通过猪肝原位移植人肝癌细胞的方法可以建立人肝癌巴马小型猪异种移植模型.免疫抑制剂能促进移植的细胞存活.