Exendin-4的表达及其降糖活性研究

摘要

根据GeneBank中登录的Exendin-4的氨基酸序列(AAB22006),结合大肠杆菌的密码子偏嗜性,对原有基因70%的密码子进行改造,使其在大肠杆菌中高效表达;同时添加KpnI和NcoI酶切位点和肠激酶识别位点,构建成重组表达载体pET-32a(+)-Exendin-4,转化大肠杆菌BL21(DE3)。在30℃条件下1mmol/L的IPTG诱导表达6h,融合蛋白表达量占细菌蛋白总量的32%。利用亲和层析纯化融合蛋白,每克湿菌体可获得纯度98%的融合蛋白6.44mg。利用肠激酶切除融合蛋白的N端融合部分,用亲和层析吸附N端融合肽,每克湿菌体可获得纯度99%的Exendin-41.59mg。腹腔注射糖尿病基因小鼠(BKS.Cg-m+/+Leprdb/J鼠),血糖浓度下降极显著,最佳用量为7μg/kg,注射后4h血糖降低达51.93%。