迟缓爱德华氏菌ETA1-L-GAPDH融合蛋白在大肠杆菌中的表达

摘要

迟缓爱德华氏菌是水产养殖中危害性极大的一种致病菌,该菌的两种外膜蛋白GAPDH和ETA1被证明可以独立产生免疫原性,具有开发成疫苗的潜力。文章将这两个蛋白融合表达以期增强疫苗的保护作用。采用PCR方法扩增出融合有gapdh基因和eta1基因的融合基因rh,将该目的基因与表达载体p ET-30a(+)连接,转入大肠杆菌BL21(DE3)菌株中表达融合蛋白,采用SDS-PAGE检测融合蛋白的表达,并用镍柱和葡聚糖凝胶Sephadex G-100对融合蛋白进行了纯化,最后通过Western-blot对纯化的融合蛋白进行了验证。结果表明融合蛋白主要以包涵体形式表达,在破碎后的菌体沉淀中该蛋白含量高达73.6%,经过纯化后的融合蛋白纯度高达90%,并通过Western-blot得到了验证。上述结果表明表达载体构建成功,目的蛋白在大肠杆菌中大量表达。