弗氏志贺菌5a 型 M90T 株 ClpB 蛋白在大肠杆菌中的融合表达和纯化

摘要

目的：构建弗氏志贺菌 clpB 基因的原核表达质粒,在大肠杆菌中表达后,纯化带 T7标签的 ClpB 蛋白。方法与结果：PCR 扩增得到线性化表达载体 pET24a 与2574 bp 的 clpB 基因片段,利用不依赖连接反应的克隆法(LIC)进行克隆,得到重组质粒 pET-ClpB,转入大肠杆菌 BL21(DE3)中进行诱导表达,通过一系列条件优化,确定可溶性表达条件为在30℃下、用1 mmol/L IPTG 诱导2 h；利用抗 T7单克隆抗体琼脂糖珠进行亲和纯化,得到了纯度很高的相对分子质量为95×103的 ClpB-T7融合蛋白。结论：实现了 ClpB-T7在大肠杆菌中的可溶性表达,并纯化获得了高纯度的融合蛋白。%10.3969/j.issn.1009-0002.2012.06.004