弗氏2a志贺氏菌2457T株YciD蛋白的融合表达和纯化

摘要

目的:原核表达重组弗氏2a志贺氏菌2457T株YeiD蛋白,为其功能研究奠定基础.方法:用PCR方法从弗氏2a志贺氏菌2457T株染色体中扩增YciD蛋白编码序列,经过纯化、酶切后克隆到原核表达载体pET32a中,构建重组载体pET32a-yciD,转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株获得工程菌株,对其表达和纯化条件进行优化;利用Western Blot检测融合蛋白的表达.结果:构建了YciD蛋白的融合表达载体,并在大肠杆菌中获得高效表达;经Ni-NTA亲和层析柱纯化获得了高纯度的YeiD蛋白;Western Blot表明,此蛋白可与His标签抗体反应,表明获得了目的蛋白.结论:在原核表达系统中表达、纯化弗氏2a志贺氏菌2457T株YciD蛋白,为进一步对其进行功能研究奠定了基础.