冻椎间盘复合表达hBMP7的髓核细胞体外构建生物椎间盘的可行性研究

摘要

目的 探讨利用液氮储存的椎间盘与表达人BMP7的髓核细胞体外构建生物活性椎间盘器官的可行性.方法 取液氮储存2个月的犬椎间盘48个,分为EGFP对照组、1×104、1×105和1×106共四组,每组12个椎间盘.对照组用22 G注射器自椎间盘后正中注入20 μL 含有1×105表达EGFP的髓核细胞,1×104组注入20 μL含有1×104 PKH-26标记的表达hBMP7的髓核细胞,1×105组注入20 μL含1×106KH-26标记的表达hBMP7的髓核细胞,1×106组注入20 μL含1×105KH-26标记的表达hBMP7的髓核细胞.注射后立即置入50 mL离心管中,加入30 mL完全培养基,分别于培养第4、7、14 d,从外源细胞存活、存活细胞量、hBMP7的表达、蛋白多糖及总胶原含量变化对体外构建的生物活性椎间盘进行评价.结果 在椎间盘培养的各时间点均可见PKH-26红色荧光和表达绿色荧光蛋白的髓核细胞存在.对不同组、不同时间点的椎间盘中荧光强度定量后发现:培养第7天、14天时1×105组荧光强度明显高于1×106组和1×104组(P<0.05).1×105组在第7、14天时hBMP7 mRNA表达量明显高于1×106组和1×104组(P<0.05),EGFP组未见表达;且1×105组在培养的第7天、14天时蛋白多糖及总胶原含量均较另外三组明显增高(P<0.05).结论 应用液氮冻存的椎间盘与1×105个表达hBMP7的髓核细胞复合,外源性髓核细胞可较长时间存活,并能增加蛋白多糖及胶原含量,是一种体外构建生物活性椎间盘的可行性方法.