负载丹酚酸B的破骨前体细胞膜纳米颗粒对成骨细胞和破骨细胞分化的影响

摘要

目的通过制备破骨前体细胞膜纳米颗粒(nanoparticles,NPs)负载丹酚酸B(salvianolic acid,SalB),构建载药纳米颗粒SalB-NPs,观察其对破骨细胞及成骨细胞分化的影响。方法采用超声裂解、挤膜的方法制备NPs,并将NPs与SalB共孵育后,使用200 nm聚碳酸酯膜挤出,获得SalB-NPs。在诱导小鼠原代破骨细胞分化和成骨前体细胞(MC3T3-E1)成骨分化的过程中,按照处理方式不同,分为对照组、SalB组、SalB-NPs组。采用透射电镜、纳米粒度及ZETA电位仪和Western Blot对材料进行表征,采用噻唑蓝检测试剂盒检测材料对RAW 264.7和MC3T3-E1细胞活力的影响,采用高效液相色谱法检测SalB的释放率和装载率。采用抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色评价破骨细胞分化能力,通过碱性磷酸酶(ALP)染色和茜素红染色评估成骨分化能力,采用Real time-PCR检测破骨细胞分化及成骨分化相关基因表达水平。结果制备的纳米颗粒直径在200 nm左右,同时表达RANK蛋白。TRAP染色显示SalB-NPs显著抑制破骨细胞的形成,下调破骨分化相关基因水平,与对照组和SalB组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。使用成骨诱导培养基诱导MC3T3-E1细胞成骨分化,14 d ALP染色和21 d茜素红染色均显示SalB-NPs组ALP活性和钙盐沉积量较SalB组明显增加,差异有统计学意义(P<0.05)。结论SalBNPs体外发挥促进成骨分化、抑制破骨细胞形成双重功效,作为骨质疏松的治疗药物开发,有很好的应用前景,未来仍需在骨质疏松模型动物进一步验证其治疗效果。