γ分泌酶抑制剂对乏氧环境下骨肉瘤细胞增殖及侵袭力影响的实验研究

摘要

目的 探讨乏氧状态下γ分泌酶抑制剂(γ-secretase inhibitors,DAPT)介导Notchl信号通路对骨肉瘤MG-63细胞系增殖、凋亡、侵袭、转移的影响及相关机制.方法 以骨肉瘤细胞株MG-63为研究对象,分为正常组(NC)、乏氧组(Hypoxia)和含有DAPT的乏氧组作为实验组(Hypoxia+DAPT).采用流式细胞仪检测处理后的细胞周期,CCK-8方法检测细胞的增殖能力,并使用Western Blot检测MG-63细胞株中Notchl、HIF-1α、Hes-1蛋白的表达情况,通过Transwell实验来验证其转移能力.同时探讨DAPT在乏氧环境下对细胞增殖和细胞周期方面的影响,分析其介导的Notch1下调情况及其抑制乏氧对MG-63细胞的促增殖作用.结果 与正常组相比较,乏氧组细胞的增殖能力及侵袭能力均较正常组有显著的提升,差异具有统计学意义(P＜0.05).而实验组与乏氧组相比较,γ泌酶抑制剂(DAPT)能显著降低其增殖及侵袭能力(P＜0.05).Western Blot结果显示,与正常组相比,乏氧组和实验组均可上调Notch1、HIF-1α、Hes-1相关蛋白的表达:但是与乏氧组对比,实验组可显著下调Notch1、HIF-1α、Hes-1蛋白的表达水平(P＜0.05).流式细胞仪结果显示:与正常组相比,乏氧组和实验组均可促进细胞由G1期转向G2期;而与乏氧组对比,实验组可显著抑制细胞由G1期转向G2期,使细胞周期停滞,差异具有统计学意义(P＜0.05).增殖实验结果显示,与正常组相比,乏氧组和实验组均可促进细胞增殖;而与乏氧组对比,实验组可显著抑制细胞增殖,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 γ分泌酶抑制剂可通过下调Notch1通路显著抑制乏氧状态下骨肉瘤细胞株MG-63的增殖与侵袭,阻断Notch1表达可能是潜在的治疗骨肉瘤的机制之一.