脂多糖对高糖环境下肝脏Kupffer细胞增殖和分泌及超微结构的影响

摘要

目的探讨脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)对高糖环境下肝脏枯否细胞(Kupffer cells,KCs)增殖和分泌功能及超微结构的影响.方法将小鼠原代KCs培养扩增后随机分为4组:高糖组[(high glucose,HG),25.0 mmol/L D-葡萄糖],正常对照组[(normal control,CON),11.1 mmol/L D-葡萄糖],LPS+高糖组[(LPS+high glucose,LPS-HG),25.0 mmol/L D-葡萄糖],LPS+正常对照组[(LPS normal+control,LPS-CON),11.1 mmol/L D-葡萄糖].培养24 h后,LPS-HG和LPS-CON组分别加入等量LPS,继续培养6 h后,四甲基偶氮唑盐比色法测定细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期,Luminex xMAP技术检测细胞上清液中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor alpha,TNF-α)、白介素(interleukin,IL)-1β、IL-6水平,透射电镜观察KCs细胞超微结构.结果MTT比色法测定结果显示,KCs经LPS干预6 h后吸光度(absorbance,OD)测值显著升高,HG和LPS-HG组的OD测值明显低于相对照的CON组和LPS-CON组(P<0.05).流式细胞仪技术检测结果显示,KCs经LPS干预6 h后G0/G1期细胞分布明显下降,S期+G2/M期细胞分布明显升高(P<0.01).HG和LPS-HG组的G0/G1期细胞分布显著高于相对照的CON和LPS-CON组,HG和LPS-HG组的S期+G2/M期细胞分布显著低于相对照的CON和LPSCON组(P<0.01);Luminex xMAP技术结果显示,KCs经LPS干预6 h后TNF-α、IL-1β、IL-6水明显升高,TNF-α和IL-1β的变化更为显著.电镜观察KCs结果显示,HG组可见自噬体形成,CON组个别细胞胞质内仅见少量空泡;LPS-HG组可见大量空泡及自噬体形成,LPS-CON组可见空泡形成而未见自噬体.结论LPS能激活并强化高糖环境中肝脏KCs的增殖和分泌功能,高糖环境和LPS均可引发肝脏KCs自噬等超微结构改变.