冬虫夏草提取物对肺炎小鼠肺泡上皮细胞的自噬作用及机制

摘要

目的探讨冬虫夏草提取物(CSE)介导哺乳动物雷帕霉素靶蛋白复合物1(mTORC1)/转录因子EB(TFEB)通路对间质性肺炎小鼠肺泡上皮细胞自噬的作用。方法75只C57BL/6雄性小鼠,随机选择15只作为正常组,另外60只用一次性鼻腔滴注博来霉素诱导间质性肺炎模型,后随机分为模型组、CSE低剂量组(20 mg·kg^(-1)·d^(-1))、CSE中剂量组(40 mg·kg^(-1)·d^(-1))和CSE高剂量组(80 mg·kg^(-1)·d^(-1)),每组各15只,正常组和模型组灌服等量生理盐水,连续28 d。检测肺组织湿干质量比(W/D);检测肺泡灌洗液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素6(IL-6)、白介素1β(IL-1β)水平;染色观察各组小鼠肺脏组织形态及纤维化情况;检测肺组织细胞凋亡水平;检测Ⅱ型肺泡上皮细胞中mTORC1、磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白复合物1(p-mTORC1)、TFEB、p62、自噬微管相关蛋白轻链3Ⅱ(LC3Ⅱ)、自噬微管相关蛋白轻链3Ⅰ(LC3Ⅰ)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)蛋白表达水平。结果与正常组比较,模型组小鼠肺脏水肿,W/D值显著提高(P<0.05);肺组织结构不完整,炎性渗出较多、胶原纤维严重沉积并见有大量细胞凋亡,肺灌洗液中TNF-α、IL-6、IL-1β水平及Ⅱ型肺泡上皮细胞中p-mTORC1、p62、α-SMA蛋白表达水平显著升高,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ及TFEB蛋白表达水平显著降低(P<0.05);与模型组比较,CSE低、中和高剂量组小鼠间质性肺炎病理症状得到显著改善,TNF-α、IL-6和IL-1β水平及Ⅱ型肺泡上皮细胞中p-mTORC1、p62和α-SMA显著降低,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ及TFEB蛋白表达水平显著升高(P<0.05),且表现出剂量依赖性。结论CSE可减轻小鼠间质性肺炎的病理损伤,降低细胞凋亡及促炎因子的表达,改善肺脏组织纤维化,其机制可能与抑制mTORC1活性、促使TFEB参与肺泡上皮细胞自噬的发生有关。