Notch信号调控肺泡上皮细胞自噬在肺炎克雷伯菌感染中的作用机制

摘要

目的 探讨Notch信号调控肺泡Ⅱ型上皮细胞自噬在肺炎克雷伯菌感染的分子机制.方法 构建肺炎克雷伯菌感染人肺泡Ⅱ型上皮细胞(ACEⅡ)A549细胞模型,在感染24 h、48 h、72 h用自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)和γ-分泌酶抑制剂(DAPT)分别作用于A549细胞,实时荧光定量PCR检测自噬相关基因LC3及Notch信号通路Notch1的mRNA表达,western blot检测LC3及Notch1的蛋白质水平表达,ELISA方法检测细胞上清液INF-γ、TNF-α及IL-1β的含量.结果 肺炎克雷伯菌感染人肺泡Ⅱ型上皮细胞A549模型24 h、48 h和72 h能明显上调Notch1及自噬相关蛋白LC3的表达,同时促进炎症因子(IL-1β、TNF-α、INF-γ)的产生;3-MA抑制细胞自噬可以下调细胞中自噬相关蛋白LC3、Notch1的表达及炎症因子的产生,DAPT抑制Notch信号可以下调Notch1、LC3的表达及炎症因子的产生.结论 肺炎克雷伯菌感染肺泡Ⅱ型上皮细胞可以激活Notch信号并诱导细胞自噬,自噬相关蛋白LC3及Notch1在转录水平及蛋白质表达水平变化趋势相同.细胞自噬和Notch信号在肺炎克雷伯菌感染肺泡Ⅱ型上皮细胞中发挥着重要的作用.