白檀SRAP-PCR体系优化及引物筛选

摘要

以白檀新生嫩叶为试材,通过单因素试验与正交实验,建立并优化白檀SRAP-PCR反应体系,对白檀SRAP反应体系中5个因素进行优化试验,并筛选SRAP引物组合,以期为今后SRAP分子标记在白檀上的应用提供依据.结果表明:各因素对SRAP-PCR扩增结果影响差异较大,依次为模板DNA＞dNTPs＞Mg2+＞引物＞Taq DNA聚合酶.最优反应体系为总体系10 μL体系中,Taq DNA聚合酶0.75U、dNTPs 0.1 mmol·L-1、Mg2+2 mmol·L-1、引物0.4 μmol·L-1以及模板DNA 80 ng.利用稳定的SRAP-PCR体系,从176对引物组合中筛选出25对多态性好的引物组合.在所建立的最优体系下,不同白檀基因组和不同引物组合均能稳定扩增,表明体系稳定可靠适用于白檀SRAP分子标记研究.