酸敏感离子通道蛋白与组织型激肽释放酶相互作用的研究

摘要

目的:观察酸敏感离子通道蛋白(ASIC1a、ASIC2a)与组织型激肽释放酶(TK)之间是否存在相互作用. 方法:RT-PCR分别获得小鼠TK、ASIC1a、ASIC2a全长cDNA,将其克隆入真核表达载体pcDNA3.1/Myc-his中,脂质体法分别将pcDNA3.1-TK和pcDNA3.1-ASIC1a、pcDNA3.1-TK和pcDNA3.1-ASIC2a共转染至人胚胎肾细胞(HEK293T),免疫共沉淀分别用抗Myc及抗TK抗体观察两者间有无相互作用.将ASICs融合蛋白与TK(100 μg/mL)共孵育,SDS-PAGE分别用抗Myc及抗TK抗体检测蛋白表达. 结果:pcDNA3.1-TK和pcDNA3.1-ASIC1a、pcDNA3.1-TK和pcDNA3.1-ASIC2a共转染后,SDS-PAGE显示抗TK抗体检测后在转染细胞内见有56 kDa 的TK条带出现,但抗Myc抗体作用未见ASICs目的条带出现.纯化的ASIC1a、ASIC2a融合蛋白与TK共孵育后,SDS-PAGE显示抗Myc抗体检测后在约66 kDa处有融合蛋白表达条带,但抗TK抗体检测后在56 kDa处无条带出现.结论: TK与ASIC1a、TK与ASIC2a之间无相互作用.