甲基化调控SLIT3和SPARCL1基因在吸烟致肺腺癌中的表达及其对患者预后的影响

摘要

目的 探讨甲基化调控SLIT3和SPARCL1基因在吸烟致肺腺癌中的表达及其对患者预后的影响。方法 通过实时定量聚合酶链式反应（qPCR）技术检测SLIT3和SPARCL1的mRNA在染烟30代恶性转化细胞（S30）以及肺腺癌细胞系中的相对表达量,并与正常人永生化支气管上皮细胞（BEAS-2B）进行比较；提取癌症基因组图谱（TCGA）计划数据库中mRNA表达、DNA甲基化和患者信息资料数据；验证SLIT3和SPARCL1的mRNA在肺腺癌组织中的表达,分析不同吸烟史患者肺腺癌组织中SLIT3和SPARCL1的mRNA表达差异并绘制患者的10年生存曲线；对TCGA数据库中肺腺癌组织中SLIT3和SPARCL1的mRNA表达和DNA甲基化高通量数据进行相关性分析,同时用甲基化转移酶抑制剂（5-aza）处理S30细胞,分析DNA甲基化对SLIT3和SPARCL1表达的调控作用。结果 S30细胞和4种肺腺癌细胞系中的SLIT3 mRNA（0.493±0.134和0.041±0.014、0.161±0.023、0.277±0.055、0.035±0.005）及SPARCL1 mRNA（0.507±0.131和0.453±0.045、0.420±0.040、0.153±0.035、0.430±0.050）相对表达量均显著低于正常BEAS-2B细胞（均P＆0.01）；肺腺癌组织中SLIT3和SPARCL1的mRNA相对表达量均显著低于癌旁正常肺组织（8.12±1.58比10.84±0.69和11.46±1.06比13.57±0.67）（均P＆0.001）,并且二者均与吸烟史显著相关（均P＆0.001）；在非吸烟患者中SLIT3和SPARCL1的mRNA高表达均有很好的预后意义；两基因启动子区域甲基化与表达呈现显著负相关（r=-0.208、-0.574：均P＆0.001）；5-aza处理可使S30细胞SLIT3和SPARCL1的mRNA表达显著上调（2.137±0.281和3.657±0.882,均P＆0.01）。结论 SLIT3和SPARCL1基因能够受到DNA甲基化调控并且在吸烟所致的肺腺癌中表达下调并对患者的预后产生影响。