采用多药耐药基因mRNA转染人单个核血细胞提高对化疗药物耐药性的体外研究

摘要

目的采用将人多药耐药基因(MDR1)mRNA导入人单个核血细胞的方法,观察跨膜糖蛋白(P-gp)在转染后单个核血细胞中的表达和功能情况,并初步探讨此方法中影响P-gp表达和功能的因素.方法体外分别合成无5′和3′UTR(非翻译区)的MDR1 mRNA[pGEM5Zf(+)-MDR1]和使用Xenopus β-globin的5′和3′UTR替代野生型5′和3′UTR的MDR1 mRNA(pT7TS-MDR1),从而构成两个试验组.然后利用脂质体为介质转染富含造血细胞的人单个核血细胞,使用流式细胞技术对MDR1基因的翻译产物P-gp的表达和功能进行检测.结果转染后12 h人单个核血细胞P-gp的表达:阴性对照组为2.16%,pGEM5Zf(+)-MDR1组为8.94%,pT7TS-MDR1组为19.14%;转染后72 h人单个核血细胞P-gp的表达:阴性对照组为2.12%,pGEM5Zf(+)-MDR1组为6.12%,pT7TS-MDR1组为10.71%.转染后12 h的Rhodamine-123排泌实验:阴性对照组为19.20%,pGEM5Zf(+)-MDR1组为25.29%,pT7TS-MDR1组为35.02%.结论转染后12 h及72 h两试验组都表现出P-gp的高表达,并且以pT7TS-MDR1组为优;转染后细胞对P-gp的表达及存在可以维持至少72 h;表达的P-gp具有外排泵功能.MDR1 mRNA转染人单个核血细胞具有提高其对化疗药物耐药性的潜质.