SNC19/ST14表达对大肠癌细胞生物学行为的影响

摘要

目的探讨SNC19/ST14表达对大肠癌细胞生物学行为的影响.方法定向克隆法构建SNC19/ST14基因全长阅读开放框(ORF)的真核表达载体;脂质体转染RKO结肠癌细胞株,筛选阳性克隆;用实时荧光定量聚合酶链反应、Western 印迹和免疫组织化学法检测SNC19/ST14蛋白的表达;MTT法测定细胞的群体倍增时间(TD);流式细胞仪测定细胞周期;罗丹明-鬼笔环肽标记细胞的骨架蛋白F-肌动蛋白,用激光共聚焦显微镜观察F-肌动蛋白的变化;并测定细胞对细胞外基质(ECM)的黏附能力.结果成功构建了真核细胞表达载体pSecTag2a-SNC19/ST14(ORF),并筛选到稳定表达SNC19/ST14蛋白的RKO-SNC19/ST14细胞;观察到SNC19/ST14使细胞骨架蛋白F-肌动蛋白的排列发生改变,并使细胞对细胞外基质的黏附能力下降,但SNC19/ST14的表达对细胞增殖、凋亡和细胞周期影响不明显.结论成功地使SNC19/ST14基因在真核细胞中稳定表达,并发现SNC19/ST14可能与细胞骨架蛋白F-肌动蛋白的聚集和极化有关,并可能通过此种作用影响到细胞对细胞外基质的黏附能力,但对细胞的增殖、凋亡及细胞周期影响不大.