单核细胞趋化蛋白-1诱导肾小管上皮-肌成纤维细胞转化的作用及机制探讨

摘要

目的探讨单核细胞趋化蛋白（MCP）-1诱导肾小管上皮细胞发生上皮-肌成纤维细胞转化（EMT）的作用和细胞分子机制,主要是 EMT 过程中 Erk1/2、P38MAPK、RhoA、RhoC、Snail 表达水平的变化。方法将 HK-2细胞分为阴性对照组,阳性对照组（TGF-β1、5μg/L）,MCP-1作用组（0.1、1、10、100μg/L）,观察不同时间（12、24、48、72 h）MCP-1刺激与α-SMA 表达水平之间的变化。用Western 印迹方法检测。肾小管上皮细胞 PErk1/2、Erk1/2、P-P38MAPK、P38MAPK、RhoA 蛋白水平的变化,用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测 RhoC、Snail 基因水平的变化。此外,分别观察 Erk、P38MAPK、Rho 信号通路的阻断剂（PD98059、SB203580、Y27632）对 MCP-1诱导 EMT 的影响。结果在不同浓度 MCP-1刺激下,HK-2细胞α-SMA mRNA 及蛋白表达水平均明显增强,以1μg/L 刺激下表达最强;在1μg/L MCP-1作用下,24、48、72 h α-SMA mRNA 及蛋白表均达显著高于阴性对照组（均P＜0.05）,48 h 作用达到最高峰。在不同浓度（0.1、1、10、100μ/L）MCP-1刺激5 min 时,HK-2细胞（PErk1/2）/（Erk1/2）和（P-P38MAPK）/（P38MAPK）的比值均显著高于阴性对照组（均 P＜0.05）,并表现为剂量依赖性。不同浓度 MCP-1刺激下 RhoA 蛋白水平和 RhoC 基因表达水平与阴性对照组比较差异均无统计学意义（均 P＞0.05）。PD98059可以部分阻断 MCP-1诱导的肾小管上皮细胞α-SMA 蛋白表达水平,与阳性对照组相比,差异有统计学意义（P＜0.05）;而 SB203580及 Y27632均不能阻断 MCP-1诱导的α-SMA 蛋白表达,与阳性对照组比较差异无统计学意义（均 P＞0.05）。MCP-1（10、100μg/L）刺激下 Snail 基因表达水平明显升高,与阴性对照组相比差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 MCP-1诱导体外培养的 HK-2细胞发生 EMT 与上调 Erk1/2信号转导通路有关,并可能与上调 Snail 转录因子水平有关,本研究未能证实该机制与 P38MAPK 信号通路及 Rho 信号转导通路有关。