α-玉米赤霉醇对肿瘤坏死因子α诱导的人内皮细胞活性氧产生及其激活信号通路的影响

摘要

目的探讨a-玉米赤霉醇对肿瘤坏死因子a（TNF-a）刺激的人脐静脉内皮细胞中活性氧（ROS）产生及其对激活信号通路的影响。方法用小分子RNA干扰（siRNA）技术消除人脐静脉内皮细胞的NADPH氧化酶p4phox亚基;用分子探针2,7-DCF测定细胞内ROS的产生量;用RT-PCR测定p47phoxmRNA的表达以及用细胞免疫组化方法测定p47phox蛋白的表达;用Western印迹测定ERK2及核因子（NF）-κB、应激蛋白（SP-1）和活化因子蛋白的表达。结果 TNF-a刺激使细胞内ROS的产生量较对照组高155.4%;a-玉米赤霉醇预处理能够剂量依赖地抑制TNF-a对ROS的诱导效应。TNF-a作用细胞24 h后,p47phox的mRNA表达水平较对照组高212.8%,蛋白的表达也明显高a-玉米赤霉醇预处理使TNF-a诱导的p47phoxmRNA表达水平低63.0%,蛋白表达水平也明显下降。p47phox的siRNA完全阻断TNF-a诱导ROS的产生。a-玉米赤霉醇预处理和p47phox的siRNA均阻断TNF-a对细胞外信号调控激酶的激活和转录因子SP-1的核转位,明显地抑制了NF-κB的核转位。结论 a-玉米赤霉醇能够抑制内皮细胞中TNF-a诱导的ROS的产生及由ROS激活的信号转导通路,主要机制是通过抑制NADPH氧化酶p47phox亚基的表达。