气道剪应力作用下黏蛋白5AC胞外极向分泌的主要介导分子

摘要

目的探讨气道剪应力（SS）作用下黏蛋白（MUC）5AC胞外极向分泌的主要介导分子。方法常规培养16HBE细胞,使用Stata软件产生随机数字随机分为5组并分别进行如下处理:A组（对照组）:10%胎牛血清（FBS）+DMEM高糖培养液继续培养,不再予任何刺激;B组（SS组）:只给予节律性旋转装置产生的SS刺激;C组[SS+Rac-1特异性抑制剂（NSC23766）组]:给予SS刺激前30 min,加入NSC23766（10μmol/L）;D组（SS+微丝肌动蛋白解聚剂组）:给予SS刺激前30 min,加入细胞松弛素D（100μg/L）;E组[SS+皮层肌动蛋白结合蛋白（Cortactin）小干扰RNA（siRNA）转染组]:用成功转染Cortactin-siRNA的细胞予以SS刺激。每个实验组设6个复孔,重复3次实验用于统计学分析。采用节律性旋转装置模拟呼吸时气流对气道产生的SS作用。用Cortactin-siRNA转染抑制Cortactin功能。酶联免疫吸附试验（ELISA）法测定细胞培养上清液中MUC5AC的胞外分泌量;Western印迹法检测Cortactin及其磷酸化（p-Cortactin）水平和转染效果;激光共聚焦显微镜观察微丝肌动蛋白的聚合情况。结果 Cortactin-siRNA转染成功。A、B、C、D、E组MUC5AC相对含量分别为0.210±0.013、0.631±0.025、0.473±0.112、0.330±0.067、0.272±0.019,B组均显著高于其他各组（P=0.000、0.043、0.000、0.000）;B组Cortactin相对表达水平为0.670±0.048,显著高于E组的0.132±0.014（P＜0.01）,但与A、C、D组的0.641±0.016、0.622±0.012、0.653±0.027比较差异均无统计学意义（均P＞0.05）;B组p-Cortactin相对表达水平为0.582±0.067,显著高于A、C、E组的0.131±0.011、0.393±0.045、0.170±0.016（P=0.000、0.021、0.000）,而D组（0.511±0.029）与B组差异无统计学意义（P=0.246）。结论 Rac-1、Cortactin和微丝肌动蛋白是气道SS作用下MUC5AC胞外极向分泌的主要介导分子。