癌胚抗原启动子驱动双自杀基因对裸鼠大肠癌移植瘤的作用

摘要

目的探讨癌胚抗原启动子（Cp）驱动的双自杀基因系统Cp-CDglyTK对裸鼠大肠癌移植瘤的治疗作用。方法 pcDNA3.1（-）Cp-CDglyTK质粒转染癌胚抗原阳性的SW480细胞和癌胚抗原阴性的HeLa细胞,反转录PCR检测目的基因的表达;给予不同浓度的前体药物5氟胞嘧啶（5-FC）及更昔洛韦（GCV）处理,用四甲基偶氮唑盐（MTT）法评估杀伤效应和旁观者效应。96只裸鼠在右侧腋窝皮下移植SW480细胞,72只移植HeLa细胞,建立大肠癌移植瘤模型。前体药物治疗实验中,取SW480和HeLa移植瘤裸鼠各48只,各分4组（ⅠⅣ,VⅧ组,n=12）,分别瘤体注射磷酸盐缓冲液（PBS）、GCV联合5-FC,腹腔注射PBS、GCV联合5-FC。自杀基因联合前体药物治疗实验中,余下48只SW480移植瘤裸鼠分为ⅨⅫ组（n=12）,24只HeLa移植瘤裸鼠分为ⅩⅢⅪⅤ组（n=12）,均经瘤体注射脂质体Lipofectamine（?）和质粒Cp-CDglyTK,再由腹腔注射药物（Ⅸ组:PBS,X组GCV,Ⅺ组:5-FC,Ⅻ组:GCV联合5-FC,ⅩⅢ组:PBS,ⅩⅨ组:GCV联合5-FC）。记录肿瘤体积、最终肿瘤重量和生存时间,比较分析各组裸鼠的治疗效果。结果转染质粒的SW480细胞有CDglyTK基因的表达,GCV联合5-FC对转染质粒的SW480细胞的抑制率（59.87%±0.21%）明显高于HeLa细胞（9.90%±0.09%,P＜0.01）,GCV与5-FC联合用药对转染质粒的SW480细胞的生长抑制率和旁观者效应大于单一使用GCV或5-FC（均P＜0.05）。Ⅱ、Ⅳ、Ⅵ、Ⅷ组分别与对照组Ⅰ、Ⅲ、V、Ⅶ组比较,肿瘤体积、最终瘤重和生存期差异均无统计学意义（均P＞0.05）。Ⅻ组最终肿瘤体积和最终瘤重均小于Ⅸ组、X组和Ⅺ组[（150.0±3.2）比（522.5±1.9）、（256.8±10.4）和（260.7±2.2）mm~3,（54.1±10.4）比（682.0±12.0）、（251.8±15.1）和（271.6±17.7）mg,均P＜0.05];Ⅻ组的肿瘤生长抑制率和生存时间大于X组和Ⅺ组[92.1%比63.1%、60.2%,（25.7±0.8）比（21.8±0.5）、（18.0±0.9）d,均P＜0.05]。ⅩⅣ和ⅩⅢ组肿瘤体积、最终瘤重和生存时间差异均无统计学意义（均P＞0.05）,ⅩⅣ组的肿瘤生长抑制率仅为0.9%。结论 Cp-CDglyTK在荷瘤裸鼠体内通过脂质体的介导,能靶向作用于癌胚抗原阳性的大肠癌细胞,并通过前体药物显著抑制裸鼠大肠癌移植瘤。