微RNA－1249调控慢性间歇低氧大鼠心肌细胞凋亡的可能机制

摘要

目的探讨微RNA（miR）-1249调控慢性间歇低氧（CIH）大鼠心肌细胞凋亡的可能机制。方法采用随机数字表法将16只8周龄雄性SD大鼠分为常氧对照组、CIH组各8只。CIH组每天9:00-17:00时给予连续8周间歇低氧处理, 常氧对照组同时给予相同频率的脉冲空气处理。实验结束时通过颈动脉插管测定大鼠血流动力学指标, 实时荧光定量PCR测定心肌组织中miR-1249及微管相关蛋白轻链3（LC3）mRNA的相对表达量, Western印迹法检测心肌组织中LC3及活化型半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（Caspase-3）的表达情况, TUNEL染色检测心肌凋亡情况。将大鼠心肌细胞株H9C2分为常氧组、间歇低氧（IH）组及转染miR-1249抑制剂并给予IH处理组（抑制剂组）, 实验结束时测定各组细胞LC3蛋白活化情况。结果 CIH大鼠左室舒张末压显著高于常氧对照组[（4.6±0.4）比（2.2±0.1）mmHg（1 mmHg=0.133 kPa）], 而左室收缩压、左室内压最大下降速率、左室内压最大上升速率均显著低于常氧对照组[（92.7±4.1）比（135.3±3.2）mmHg、（4 247±108）比（7 626±235）mmHg/s、（3 168±105）比（6 028±81）mmHg/s]（均P＆0.001）。CIH大鼠心肌组织miR-1249相对表达量显著高于常氧对照组, LC3 mRNA相对表达量显著高于常氧对照组（均P＆0.001）, 且两者间呈正相关;CIH大鼠心肌组织中LC3及活化型Caspase-3蛋白相对表达量均显著高于常氧对照组（均P＆0.001）;CIH大鼠心肌细胞凋亡比例显著高于常氧对照组[（23.84±4.94）%比（2.93±0.73）%]（P＆0.001）。抑制剂组心肌细胞LC3活化程度显著低于IH组, 但高于常氧组。结论 CIH可通过上调miR-1249表达诱导LC3蛋白表达, 进而诱导凋亡蛋白Caspase-3活化, 最终诱导大鼠心肌凋亡。