TNF-α诱导心肌成纤维细胞增殖的信号转导机制研究

摘要

目的研究TNF-α诱导心肌成纤维细胞增殖的信号转导机制,为设计早期防治心肌梗死和心衰的药物提供分子靶点。方法心肌成纤维细胞体外原代和传代培养后,用不同浓度的TNF-α刺激心肌成纤维细胞一定时间,用Western blot检测细胞膜Gq蛋白的表达;放射免疫方法测定细胞内三磷酸肌醇（IP3）的表达;薄层层析分析法测定细胞内DAG水平;免疫组化技术检测细胞内PKC的含量;流氏细胞方法检测细胞内Ca2＋的释放;MTT法检测细胞增殖水平。结果 F-α能不同程度的诱导细胞Gq蛋白、IP3、Ca2＋、DAG和PKC的增加,并表现了明显的时间-效应关系。剂量效应关系显示：20ng/ml TNF-α对Gq蛋白、IP3、PKC结果的影响较其它两个剂量组明显（P〈0.05）,而细胞内DAG和Ca2＋的水平在各剂量组间无明显差异,但与对照组比较差异有统计学意义（P〈0.05）。在这些信号物质改变的模式下,心肌成纤维细胞增殖水平较对照组明显增高（P〈0.05）。结论α通过激活细胞膜Gq蛋白介导的IP3/Ca2＋和DAG/PKC途径诱导心肌成纤维细胞增殖,并以20ng/mlTNF-α较明显。