基于NF-κB p65信号通路探讨金汁修复受损的小鼠肠黏膜上皮细胞的机制

摘要

目的观察金汁含药血清对脂多糖(LPS)诱导的小鼠肠黏膜上皮细胞自噬相关蛋白及NF-κB p65信号通路的影响,探讨其对肠黏膜上皮细胞的保护作用机制。方法选择雄性BALB/c小鼠制备空白血清和不同浓度(10%,15%,20%)的金汁含药血清。将LPS诱导的体外培养的小鼠肠黏膜上皮细胞随机分成空白组、模型组(LPS+空白血清)及金汁低含药血清组(LPS+10%金汁含药血清)、金汁中含药血清组(LPS+15%金汁含药血清)、金汁高含药血清组(LPS+20%金汁含药血清),各组干预24 h后,用透射电镜观察肠黏膜上皮细胞自噬情况,q-PCR法检测细胞中LC3A、LC3B mRNA表达情况,Western blot法检测细胞中LC3Ⅰ/LC3Ⅱ、p65、p-p65表达情况,ELISA法检测细胞上清液中白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量。结果与空白组比较,模型组细胞内的双层膜结构明显减少,细胞中LC3A、LC3B mRNA相对表达量及LC3Ⅰ/LC3Ⅱ均明显降低(P均<0.05),p65、p-p65相对表达量及IL-1β、IL-6、TNF-α含量均明显升高(P均<0.05)。与模型组比较,金汁高含药血清组自噬体明显增多;金汁高含药血清组LC3A mRNA相对表达量和金汁低、中、高含药血清组LC3B mRNA相对表达量及LC3Ⅰ/LC3Ⅱ均明显升高(P均<0.05),金汁低、中、高含药血清组细胞中p65、p-p65相对表达量和金汁中、高含药血清组IL-1β、IL-6、TNF-α含量均明显降低(P均<0.05)。结论金汁含药血清可通过抑制NF-κB p65信号通路,促进肠黏膜上皮细胞自噬而修复受损的小鼠肠黏膜上皮细胞。