水蛭素对TGF-β_(1)诱导的肺成纤维细胞增殖及转分化的影响研究

摘要

目的研究水蛭素对转化生长因子β_(1)(TGF-β_(1))诱导小鼠胚肺成纤维细胞(NIH3T3)向肌成纤维细胞转化的影响及相关机制。方法培养NIH3T3细胞,分别用浓度为0.3 ATU/mL、0.6 ATU/mL、1.2 ATU/mL、2.4 ATU/mL、4.8 ATU/mL、9.6 ATU/mL水蛭素处理NIH3T3细胞24 h,采用CCK-8试剂检测细胞活力,根据CCK-8结果选择浓度为1.2 ATU/mL、2.4 ATU/mL、4.8 ATU/mL水蛭素进行实验。实验分为6组:空白对照组细胞常规培养,水蛭素组细胞加入4.8 ATU/mL水蛭素培养,TGF-β_(1)组细胞加入10 ng/mL TGF-β_(1)培养,TGF-β_(1)+水蛭素1.2 ATU/mL组、TGF-β_(1)+水蛭素2.4 ATU/mL组、TGF-β_(1)+水蛭素4.8 ATU/mL组分别加入相应浓度水蛭素后30 min再加入10 ng/mL TGF-β_(1)培养。采用CCK-8试剂检测各组细胞活力,qRT-PCR和Western blot法分别检测各组细胞中Ⅰ型胶原蛋白(CollagenⅠ)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)mRNA及蛋白表达量。结果4.8 ATU/mL水蛭素对细胞无毒性作用,1.2 ATU/mL、2.4 ATU/mL、4.8 ATU/mL水蛭素能抑制TGF-β_(1)诱导所致的NIH3T3细胞活力升高,且2.4 ATU/mL、4.8 ATU/mL水蛭素抑制作用更显著。TGF-β_(1)组细胞中CollagenⅠ、α-SMA mRNA及蛋白表达量均明显高于空白对照组(P均<0.05),TGF-β_(1)+水蛭素2.4 ATU/mL组、TGF-β_(1)+水蛭素4.8 ATU/mL组细胞中CollagenⅠ、α-SMA mRNA及蛋白表达量均明显低于TGF-β_(1)组(P均<0.05)。结论水蛭素可以抑制TGF-β_(1)诱导的NIH3T3细胞增殖和肺成纤维细胞向肌成纤维细胞表型转化。