冷冻鱼糜中微生物谷氨酰胺转胺酶ELISA检测方法的建立及应用

摘要

本文研究了冷冻鱼糜中微生物谷氨酰胺转胺酶(MTG)的双抗体夹心酶联免疫检测方法(sandwich-ELISA法),以抗MTG兔多抗为包被抗体,抗MTG鼠单抗为检测抗体,再结合HRP标记的抗IgG1二抗,构成sandwich-ELISA检测方法,对冷冻鱼糜中是否添加MTG进行定量检测,防止冷冻鱼糜原料掺假.实验结果表明,包被抗体的最佳工作浓度是2.00 μg/mL,检测抗体的最佳工作浓度为0.10 μg/mL,酶标二抗的最佳稀释倍数为1∶5000.方法的检测限为20 ng/mL,该检测方法在0.6 mg/mL～10 mg/mL范围内OD450值与MTG浓度的log值呈线性关系.建立掺假冷冻鱼糜样品模拟体系,测定其中MTG的添加量:MTG的添加回收率为94％以上,测定过程中回收率结果的板内变异系数为1.12％～4.02％,板间变异系数为5.43％～6.87％.经试验证明该方法灵敏度高,样品前处理简便,适用于冷冻鱼糜中MTG的定量检测.