过表达miR-150通过PI3K/AKT信号通路调控结直肠癌细胞凋亡的机制研究

摘要

目的探讨过表达miR-150通过磷脂酰肌醇-3-羟激酶/丝苏氨酸蛋白激酶(phosphatidylinositol 3-hydroxykinase/seronine kinase,PI3K/AKT)信号通路调控结直肠癌细胞凋亡的机制。方法将体外培养HT-29细胞分为空白对照组(转染空脂质体)NC组(转染mimic)和miR-150(转染miR-150 mimic);采用RT-PCR检测转染后细胞中miR-150 mRNA水平;CCK-8法检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡;WB法检测Cleaved caspase3、PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT蛋白表达。将对数生长期HT-29分为阴性对照组、miR-150组、LY294002组和LY294002+miR-150组,采用PI3K抑制剂验证LY294002在HT-29细胞凋亡中的作用。结果与空白对照组和NC组相比,miR-150组细胞中miR-150 mRNA水平明显升高(P<0.05),24 h、48 h、72 h和96h的细胞抑制率明显升高(P<0.05),细胞凋亡率明显升高(P<0.05),Bcl-2/Bax、p-PI3K/PI3K和p-Akt/Akt蛋白的表达明显降低(P<0.05),cleaved Caspase-3蛋白的表达明显升高(P<0.05);与阴性对照组相比,miR-150组和LY294002组p-Akt/Akt和Bcl-2/Bax蛋白表达均明显降低(P<0.05),cleaved Caspase-3蛋白表达明显升高(P<0.05);与miR-150组相比,LY294002+miR-150组p-Akt/Akt和Bcl-2/Bax蛋白表达均明显升高(P<0.05),cleaved Caspase-3蛋白表达明显降低(P<0.05)。结论miR-150过表达可能通过负调控PI3K/AKT信号通路抑制人结直肠癌细胞的增殖,促进其凋亡。