不同处理条件下11种有毒药用植物的DNA条形码鉴定

摘要

目的:为了快速准确地鉴定中毒事件中毒源植物的种类,对有毒药用植物开展基于DNA条形码技术的分子鉴定研究.方法:选取11种有毒药用植物,对植物叶片组织材料进行硅胶干燥、沸水加热及胃液消化等21种不同条件的处理,采用直接聚合酶链式反应(PCR)法,选用6种引物扩增常用的5个植物DNA条形码序列,检测不同处理方法下扩增与测序的成功率.对于通过测序获得的DNA条形码序列,使用Blast法开展鉴定分析工作.结果:硅胶干燥材料的PCR成功率普遍低于未处理或短时间沸水处理的新鲜材料.短时间沸水加热处理并不会影响PCR的成功率,而沸水处理超过15 min时PCR扩增成功率急剧下降.在胃液结合短时间沸水处理条件下,PCR成功率仍然可以维持在较高的水平,而PCR扩增成功率同样在沸水处理材料15 min后显著下降.通过测序获得的DNA条码序列使用Blast方法进行鉴定,其科、属水平的准确率较高,而种水平的准确率普遍较低.内转录间隔区(ITS)片段种级鉴定准确率显著高于叶绿体区段,而叶绿体区段中psbA-trnH的种级鉴定准确率最高.结论:直接PCR扩增获取DNA条形码的方法在实际中毒案例植物的鉴定中具有一定的应用前景.