天山雪莲RAPD反应条件的优化及再生体系DNA多态性分析

摘要

目的:用RAPD法研究天山雪莲再生过程中DNA的变异.方法:优化RAPD反应体系中各影响因素,分别以天山雪莲种子苗、愈伤组织、丛生芽及再生植株的总DNA为模板,进行多态性分析.结果:优化反应体系为:Mg2+2.50mmol·L-1、Taq DNA聚合酶1.00U、引物0.30μmal·L-1、模板DNA 20ng、dNTPo.20mmol·L-1,退火温度为37℃.加条随机引物共扩增出174条带,平均每条引物扩增8.7条带,其中多态性条带18条,多态性位点比率为10.3%.天山雪莲再生体系与种子苗之间相似性系数为0.75～0.80,,结论:天山雪莲再生过程中在DNA水平上发生了一定程度的变异.