基于颜色判定的环介导恒温扩增法快速检测结核分枝杆菌

摘要

目的 建立快速检测结核分枝杆菌环介导的恒温扩增法.方法 针对结核分枝杆菌特异性保守靶序列IS6110,采用环介导的恒温扩增法(LAMP)引物设计原则设计6条引物,特异性识别靶基因序列上8个独立区域.LAMP反应过程中会产生焦磷酸镁白色沉淀,可以通过实时监测反应液浊度来判断反应结果.结果 试验表明,在60～ 65℃恒温条件下,LAMP反应60 min内即可完成；如果在反应前添加钙黄绿素,可通过反应液颜色的变化来判断反应结果；LAMP方法的最低检出核酸浓度为101 pg/μl,其灵敏度是PCR方法最低检出浓度1.01 ng/μl的10倍,且具有良好的特异性.结论 LAMP方法检测结核分枝杆菌具有简单、快速、价廉、特异性强、灵敏度高等特点,适用于疾控工作及临床筛查或快速检测结核杆菌.