含5种烈性出血热病毒的假病毒阳性参考品的制备

摘要

目的 利用慢病毒载体系统制备含有马尔堡病毒（Marburg virus）、扎伊尔型埃博拉病毒（Zaire Ebola virus）、苏丹型埃博拉病毒（Sudan Ebola virus）、拉沙热病毒（Lassa fever virus）和黄热病毒（Yellow fever virus）5种烈性病毒核酸片段的假病毒,为其核酸检测提供一种通用的阳性参考品。方法 体外合成该5种病毒的目的基因片段,通过融合PCR技术将5个片段连接成一条基因,然后克隆到慢病毒表达载体上,并与其辅助载体共转染293T细胞;转染后分别于48、72 h收集培养上清,用DNase和RNase进行消化处理及纯化浓缩,最后提取核酸,利用普通PCR和实时荧光定量PCR鉴定假病毒是否包装成功。结果 测序结果表明,体外合成的该5种病毒的目的基因片段已正确连接并插入慢病毒载体中;载体转染293T细胞后收集上清中的假病毒,提取核酸经上述两种PCR鉴定均可特异性检测到靶基因,表明已成功包装出含该5种出血热病毒靶基因的假病毒颗粒。结论 该研究获得的假病毒颗粒可作为上述5种出血热相关烈性病毒核酸检测的通用阳性参考品。