利用凝胶过滤层析技术分离人源γ-微管环形复合物

摘要

目的分离人源γ-微管蛋白环形复合物（γ-tubulin ring complex,γTuRC）。方法利用凝胶过滤层析技术分离人源293FT细胞裂解产物;利用免疫印迹检测γTuRC和γ-微管蛋白小复合物（γ-tubulin small complex,γTuSC）所在的洗脱组分,实现复合物与游离蛋白分离。结果γTuRC复合物组成型组分γ-微管蛋白（γ-tubulin）、γ-微管蛋白复合物蛋白2（γ-tubulin complex protein 2,GCP2）、GCP3和GCP4在第4洗脱组分（4#）被洗脱富集,该组分相对分子质量约为2×106;γTuSC复合物组成型组分γ-tubulin、GCP2、GCP3蛋白在14#洗脱组分被洗脱富集,该组分相对分子质量约为3.1×105;未掺入的游离蛋白组分在18#洗脱组分后被洗脱下来。非变性凝胶电泳可在相应组分中检测到γTuRC和γTuSC复合物。结论γTuRC复合物在凝胶过滤层析4#洗脱组分得到富集;γTuSC复合物在14#洗脱组分得到富集。上述复合物与游离蛋白成功分离,可用于后续复合物组装研究。