凝胶过滤层析

摘要： 以香菇柄为原料,采用热水浸提联合离子层析和凝胶过滤层析对其中多糖进行提取纯化,并就所得多糖的抗氧化活性进行初步研究.结果显示,热水浸提法提取香菇柄粗多糖得率可达4.3％,将该粗多糖依次经由离子交换层析和凝胶过滤层析纯化后多糖得率为2.26％.得到的香菇柄多糖干品为棕色粉末,易溶于水,对DPPH自由基和ABTS+自由基的清除效果存在一定的量效关系,清除这两种自由基的能力均可达到30％以上.相关结果可为香菇柄的综合开发利用提供基础数据和理论指导.

摘要： 以香菇柄为原料,采用热水浸提联合离子层析和凝胶过滤层析对其中多糖进行提取纯化,并就所得多糖的抗氧化活性进行初步研究。结果显示,热水浸提法提取香菇柄粗多糖得率可达4.3%,将该粗多糖依次经由离子交换层析和凝胶过滤层析纯化后多糖得率为2.26%。得到的香菇柄多糖干品为棕色粉末,易溶于水,对DPPH自由基和ABTS+自由基的清除效果存在一定的量效关系,清除这两种自由基的能力均可达到30%以上。相关结果可为香菇柄的综合开发利用提供基础数据和理论指导。

摘要： 本研究以酶解法提取雁血多肽,探究提取工艺对水解度的影响,以新鲜鸿雁血为原料,通过单因素实验和响应面试验优化提取工艺,并通过SDS-PAGE电泳测定分子量分布,同时采用小鼠脾淋巴细胞体外增殖检测实验,并以超滤法和凝胶过滤层析法对雁血多肽进行分离纯化.采用ELISA法检测细胞因子IL-2、IFN-γ、PGE2的含量.结果 表明,最佳提取工艺为酶解温度47°C,pH7,加酶量4500 U/g,此时水解度为29.29％;复合蛋白酶酶解效果最优;雁血蛋白酶解前后在不同浓度下均可促进淋巴细胞的增殖活性;从雁血多肽中分离纯化出3种组分多肽;ACP1、ACP2、ACP3均可促进小鼠淋巴细胞分泌IL-2、IFN-γ,抑制分泌PGE2,且ACP2在100 μg/mL浓度下效果最佳,由此可以判定雁血多肽具有一定的免疫调节作用,这为雁血多肽免疫机理的深度开发提供了理论依据.

摘要： 目的 分别用新型复合型层析介质Capto Core 400和传统介质Sepharose 6FF纯化Sabin株脊髓灰质炎病毒(Sabin strain poliovirus,sPV)去除宿主细胞蛋白(hostcell protein,HCP)和DNA,并且比较纯化结果及工艺参数.方法 用Capto Core 400与Sepharose 6FF纯化Vero细胞培养的Ⅰ、Ⅱ、ⅢsPV浓缩液.分别检测纯化后sPV的D抗原含量、HCP残留量和DNA残留量,计算D抗原回收率、HCP和DNA去除率,并用t检验分析差异.结果 Capto Core 400与Sepharose 6FF纯化Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型sPV的D抗原回收率差异均无统计学意义(t值分别为1.09、1.08、1.02,P值均＞0.05),但前者的Vero细胞HCP(t值分别为3.15、3.23、3.54)和DNA去除率均高于后者(t值分别为3.41、3.25,3.62),且差异有统计学意义(P值均＜0.05).Capto Core 400与Sepharose 6FF的介质使用体积比值为0.05,上样后纯化时间比值为0.04,工作缓冲液使用量比值为0.25,工艺线性流速比值为10,每升介质上样量比值为20,最大耐压力比值为2.结论 对比Sepharose 6FF,Capto Core 400可以更有效地去除Vero细胞HCP与DNA,各个工艺参数得到了优化,提高了sPV层析纯化的工作效率,并节约了时间和成本.

摘要： 为获得较高纯度的猪圆环病毒2型(porcine circovirus type 2,PCV2) Cap蛋白的病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs)并对其进行结构和功能研究,本试验以大肠杆菌表达系统表达了PCV2重组Cap (PCV2 rCap)蛋白,通过硫酸铵分级沉淀、Sephacryl S-300 HR凝胶过滤层析、Capto Q离子交换层析、CsCl密度梯度离心等方法对其进行了纯化.通过Western blotting对纯化所得蛋白进行免疫反应性鉴定,透射电镜(TEM)观察纯化蛋白的粒径及形态,高效液相尺寸排阻色谱(HPSEC)检测其组分分布.结果 显示,纯化后PCV2 rCap蛋白经SDS-PAGE检测,可见28 ku的目的蛋白带,灰度扫描法检测其纯度为97.53％.Western blotting结果显示,该处的特异性蛋白条带有明显的免疫反应性;TEM检测其为粒径17.35～19.24 nm的规则球形颗粒,表明所获得的PCV2 rCap蛋白在表达时能在菌体内自我装配成VLPs,且在纯化过程中没有被破坏而解聚,仍保持天然状态;HPSEC检测纯化样品中VILPs含量为92.67％.本试验结果为进一步研究PCV2 VLPs的空间结构及其免疫保护机制提供了参考依据.

摘要： 目的:以毕赤酵母细胞通过基因重组技术表达重组人表皮生长因子(Human Epidernal Growth Factor,以下简称hEGF)发酵液为原料,建立一种hEGF纯化方法.方法:以高速离心技术、膜过滤技术,浓缩脱盐技术为主的粗纯工艺;应用弱阳离子交换层析和凝胶色谱层析为主要精细纯化工艺,hEGF样品最终冻干保存.结果:以该纯化工艺最终可获得高纯度的hEGF,经Tricine-SDS-PAGE电泳检测及HPLC-C8色谱柱分析检测其纯度可达92％以上.结论:应用此纯化工艺得到的hEGF纯度大于92％、在化妆品原料方面可用于进一步工业化研究.

摘要： pH gradient method is commonly adopted for loading drug into liposome.Depending on pH gradient,drug in the external water phase of liposome could enter into the internal phase.The citric acid buffer (pH4.0) in external water phase of liposome was changed into phosphate buffer (pH7.2) by gel filtration chromatography technology.The pH gradient had found between the internal and external water phase of liposome.Doxorubicin (DOX) could enter through the lipid membrane into the internal phase driving by pH gradient.When the ratio of drug with lipid were 1 ∶ 5,1∶10,1∶15,and 1∶20 (w/w),the encapsulation rates were 96.7％,98.7％,96.8％ and 98.7％,respectively.Among the above liposome,the encapsulation rate of the liposome with 1 ∶ 10 (drug:lipid) was the highest.The drug leakage rate of DOX liposome was less than 1.0％ and 5.0％ within 12 h or 48 h at 37 °C.Through the experiment,the students could realize how to adjust pH gradient using gel filtration chromatography technology,as well as the pH gradient was very important for loading DOX into liposome.It would be built good basis for students studying the liposome delivery system.%通过对脂质体内外水相pH梯度的制备方法的探讨,采用凝胶过滤层析技术将脂质体外水相的pH4.0柠檬酸缓冲液替换成pH7.2磷酸盐缓冲液,在脂质体内外水相形成pH梯度.在药脂比为1∶5、1∶10、1∶15和1∶20(质量比)时,阿霉素在pH梯度的驱动下从脂质体外水相穿越脂质双分子膜进入内水相,包封率分别达到96.7％、98.7％、96.8％和95.1％,其中药脂比1∶10时包封率达到最高.药脂比1∶10制备的阿霉素脂质体在37°C,12h内阿霉素泄漏均低于1.0％;48 h内药物泄露率低于5.0％.通过该实验,使学生们能够观测到如何采用凝胶过滤层析技术调节pH梯度,以及pH梯度在阿霉素脂质体主动载药过程中的重要性,为脂质体递释系统的课堂理论教学奠定了良好的实验基础.

摘要： 设计“ÄKTAprime plus蛋白质层析系统纯化绿色荧光蛋白(GFP)”的综合实验，以 GFP 蛋白为研究对象，在大肠杆菌中大量表达重组 GFP蛋白，经镍柱亲和层析、离子交换层析以及凝胶过滤层析3种常用层析技术逐步纯化，各步纯化样品经 SDS-PAGE 鉴定分析，最终获得高纯度的 GFP 蛋白。通过该实验使学生深入、全面、系统地掌握生命科学研究中最新的蛋白质分离纯化技术，提高学生的科研水平和综合能力。%The comprehensive experiment of“AKTAprime plus protein chromatography system purifying green fluorescent protein (GFP)”,was designed.The high-purity GFP protein will be purified from Escherichia coli by nickel affinity chromatography,ion exchange chromatography and gel filtration chromatography combined with SDS-PAGE analysis.Students’scientific research level and comprehensive ability will be improved through deeply,comprehensively and systematically mastering the latest protein separation and purification technology.

摘要： The lactic acid bacterial protein were separated and purified by gel-filtration chromatography. Se-lecting different gel-filtration chromatography media,column height,flow rate and sample weight to elute lactic acid bacterial protein of Sephadex G-25 desalting. The elution peak was observed. The result showed that all theabove four factors could affect the separation and purification performance of the lactic acid bacterial protein ingel-filtration chromatography by various degrees. In this test,the best separation and purification performancewas achieved using Sephadex G-75 with 45 cm column height,0.75 mL/min flow rate and 5%CV sample weight.%采用凝胶过滤层析分离纯化乳酸菌菌体蛋白,选择不同的凝胶过滤介质、过滤柱高度、洗脱流速、样品上样量对经过SephadexG-25脱盐处理的乳酸菌菌体蛋白进行洗脱,观察洗脱峰.结果表明,凝胶过滤介质、过滤柱过度、洗脱流速和样品上样量均不同程度的影响菌体蛋白的纯化效果.在本试验中,分离纯化乳酸菌菌体蛋白的凝胶过滤层析参数为:SephadexG-75的层析介质以45 cm的柱床高度,洗脱流速0.75 mL/min,样品上样量为5%CV时,对乳酸菌菌体蛋白可达到最佳的分离纯化效果.

摘要： 目的:初步分离蜈蚣胃蛋白酶酶解液的抗凝活性部位，检测活性部分的分子量分布范围。方法:用葡聚糖凝胶G-100过滤层析柱对蜈蚣胃蛋白酶酶解液进行初步分离，以紫外检测法、考马斯亮兰法检测，合并凝胶层析蛋白流分；以APTT凝血时间为指标，检验各组分体外抗凝活性；通过MALDI-TOF-MASS法检测分离部分的分子量分布范围。结果:蜈蚣酶解液通过凝胶过滤层析分得的两组分抗凝效果显著，分子量分布范围850-5300。结论:体外抗凝试验表明凝胶过滤层析法纯化分离蜈蚣胃蛋白酶酶解液方法可行，MALDI-TOF-MASS表明活性组分为小分子肽类。

摘要： 通过单因素和正交试验确定了麦胚凝集素(WGA)的最佳提取条件(提取时间3.4h,甲酸浓度0.5mol/L,液料比10.15),并建立了利用盐析分级、选择性热处理、部分水解甲壳素亲合层析和凝胶过滤层析对WGA进行高效纯化的工艺.研究了WGA的理化稳定性,发现WGA的活性随常压热处理温度、时间的增加而降低,而且对于湿热处理比干热处理更敏感.WGA在加压蒸汽处理(2.4kg/cm2,20min)和挤压处理(145°C,140r/min)后完全丧失活性.WGA的活性在pH7.0～8.5范围内最高,在pH≤2.5或H≥11.0时完全丧失.WGA的活性随茶多酚浓度的增加而显著降低,在茶多酚浓度达到15g/L时完全丧失。

摘要： 半乳糖醛酸酶抑制蛋白(PGIP)是位于植物细胞壁的糖蛋白,PGIP能够特异性地抑制内外源混合PGs对细胞壁的降解,从而达到抵御病原菌侵入的目的.本研究旨在研究酥梨(P.bretschneideri Rehd.)PGIP的提取、纯化及其特征特性.经高盐法提取和凝胶过层析,获得相对纯度为18.9倍的PGIP,保留活性分别为51.6％;经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹分析,表明相对纯化的酥梨PGIP的分子量为42kD,用TFMS进行化学去糖基化处理,PGIP分子量变为35KD,即糖对成熟蛋白总质量的贡献为17％.其活性受pH影响,但对提取液中KCl的浓度及提取时间不敏感;温度对PGIP抑制活性有影响,在85°C处理20分钟,PGP失去85％～90％的抑制活性,在100°C下,PGIP活性全部丧失.

摘要： 半乳糖醛酸酶抑制蛋白(PGIP)是位于植物细胞壁的糖蛋白,PGIP能够特异性地抑制内外源混合PGs对细胞壁的降解,从而达到抵御病原菌侵入的目的.本研究旨在研究酥梨(P.bretschneideri Rehd.)PGIP的提取、纯化及其特征特性.经高盐法提取和凝胶过层析,获得相对纯度为18.9倍的PGIP,保留活性分别为51.6％;经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹分析,表明相对纯化的酥梨PGIP的分子量为42kD,用TFMS进行化学去糖基化处理,PGIP分子量变为35KD,即糖对成熟蛋白总质量的贡献为17％.其活性受pH影响,但对提取液中KCl的浓度及提取时间不敏感;温度对PGIP抑制活性有影响,在85°C处理20分钟,PGP失去85％～90％的抑制活性,在100°C下,PGIP活性全部丧失.

摘要： 半乳糖醛酸酶抑制蛋白(PGIP)是位于植物细胞壁的糖蛋白,PGIP能够特异性地抑制内外源混合PGs对细胞壁的降解,从而达到抵御病原菌侵入的目的.本研究旨在研究酥梨(P.bretschneideri Rehd.)PGIP的提取、纯化及其特征特性.经高盐法提取和凝胶过层析,获得相对纯度为18.9倍的PGIP,保留活性分别为51.6％;经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹分析,表明相对纯化的酥梨PGIP的分子量为42kD,用TFMS进行化学去糖基化处理,PGIP分子量变为35KD,即糖对成熟蛋白总质量的贡献为17％.其活性受pH影响,但对提取液中KCl的浓度及提取时间不敏感;温度对PGIP抑制活性有影响,在85°C处理20分钟,PGP失去85％～90％的抑制活性,在100°C下,PGIP活性全部丧失.

摘要： 半乳糖醛酸酶抑制蛋白(PGIP)是位于植物细胞壁的糖蛋白,PGIP能够特异性地抑制内外源混合PGs对细胞壁的降解,从而达到抵御病原菌侵入的目的.本研究旨在研究酥梨(P.bretschneideri Rehd.)PGIP的提取、纯化及其特征特性.经高盐法提取和凝胶过层析,获得相对纯度为18.9倍的PGIP,保留活性分别为51.6％;经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹分析,表明相对纯化的酥梨PGIP的分子量为42kD,用TFMS进行化学去糖基化处理,PGIP分子量变为35KD,即糖对成熟蛋白总质量的贡献为17％.其活性受pH影响,但对提取液中KCl的浓度及提取时间不敏感;温度对PGIP抑制活性有影响,在85°C处理20分钟,PGP失去85％～90％的抑制活性,在100°C下,PGIP活性全部丧失.

摘要： 聚烯烃微多孔膜，膜厚为1μm～400μm，满足式(1)及式(2)或者满足式(3)及式(4)。式(1)：0.7≤τX/τZ≤1.5，式(2)：0.7≤τY/τZ≤1.5，τX：沿着聚烯烃微多孔膜的面的第一方向的迂曲度，τY：沿着聚烯烃微多孔膜的面的第二方向的迂曲度，τZ：聚烯烃微多孔膜的厚度方向的迂曲度。式(3)：0.5≤TX/TZ≤2.0，式(4)：0.5≤TY/TZ≤2.0，TX：沿着聚烯烃微多孔膜的面的第一方向的透过性指标，TY：沿着聚烯烃微多孔膜的面的第二方向的透过性指标，TZ：聚烯烃微多孔膜的厚度方向的透过性指标。

摘要： 本发明涉及一种色谱分离层析柱，包括筒体、上盖和下盖，在上盖与筒体之间以及下盖与筒体之间设有微孔板、导流板，在上盖和下盖上设有分布器和管道接口，在分布器上设有正吹口和微孔板泄漏口，在分布器中设有可上下移动的喷淋分配头，喷淋分配头上设有进料口，在筒体外还设有装卸柱器、树脂罐、洗涤液罐和收集罐与筒体管道连接。其有益效果是：本发明可在一个密闭的空间内实现离子交换层析过滤的所有步骤，具有质量稳定、效率高的优点。

摘要： 本发明提供了一种具有粘度恢复能力的淋浴过滤器用凝胶组合物、一种制造淋浴凝胶过滤器的方法和一种淋浴过滤器。更具体而言，该淋浴过滤器用凝胶组合物包含糊精、香料、水和水溶性纤维素醚，并且可以还包含用于除去水中含有的残余氯和有害物质的维生素C，以及用于使使用者识别具体类型的香料的食用色素。

摘要： 聚烯烃微多孔膜，膜厚为1μm～400μm，满足式(1)及式(2)或者满足式(3)及式(4)。式(1)：0.7≤τX/τZ≤1.5，式(2)：0.7≤τY/τZ≤1.5，τX：沿着聚烯烃微多孔膜的面的第一方向的迂曲度，τY：沿着聚烯烃微多孔膜的面的第二方向的迂曲度，τZ：聚烯烃微多孔膜的厚度方向的迂曲度。式(3)：0.5≤TX/TZ≤2.0，式(4)：0.5≤TY/TZ≤2.0，TX：沿着聚烯烃微多孔膜的面的第一方向的透过性指标，TY：沿着聚烯烃微多孔膜的面的第二方向的透过性指标，TZ：聚烯烃微多孔膜的厚度方向的透过性指标。

摘要： 本发明涉及一种离子交换层析过滤方法，离子交换、层析、固液分离、液液分离、洗涤、过滤、再生步骤在一台色谱分离层析柱内一次性密闭完成。还涉及色谱分离层析柱，包括筒体、上盖和下盖，在上盖与筒体之间以及下盖与筒体之间设有微孔板、导流板，在上盖和下盖上设有分布器和管道接口，在分布器上设有正吹口和微孔板泄漏口，在分布器中设有可上下移动的喷淋分配头，喷淋分配头上设有进料口，在筒体外还设有装卸柱器、树脂罐、洗涤液罐和收集罐与筒体管道连接。其有益效果是：离子交换层析过滤方法具有质量稳定、效率高的优点；色谱分离层析柱具有在一个密闭的空间内实现离子交换层析过滤的所有步骤的优点。

摘要： 本发明涉及一种过滤系统(10)和这种过滤系统的应用，并且本发明用于过滤空气流。根据本发明的过滤系统(10)具有第一过滤级中的过滤元件(1)和用于容纳所述过滤元件(1)的壳体(20)，所述过滤元件(10)具有过滤材料(2)。在所述过滤元件(1)和所述壳体(20)之间有利地设置环绕的凝胶密封件(4)，用于相对于壳体(20)密封所述过滤元件(1)。所述凝胶密封件特别是涉及成凝胶通道(4.1)。通过这种过滤系统(10)确保了能操作简单地安装过滤元件(1)和在装配状态下无泄漏的密封。

摘要： 本发明一种混合床凝胶过滤层析技术用于病毒性疫苗纯化的方法，属于生物技术领域，其步骤为，将Sepharose 4FF凝胶与Sepharose 6FF凝胶充分混匀后装填于柱中，将超滤浓缩后的病毒抗原上样于混合床柱进行凝胶过滤层析，获得纯化的病毒抗原。本发明提供了一种纯化效果好、抗原回收率高的病毒抗原纯化新方法，纯化的病毒抗原适合于制备疫苗。

摘要： 本发明一种混合床凝胶过滤层析技术用于病毒性疫苗纯化的方法，属于生物技术领域，其步骤为，将Sepharose 4FF凝胶与Sepharose 6 FF凝胶充分混匀后装填于柱中，将超滤浓缩后的病毒抗原上样于混合床柱进行凝胶过滤层析，获得纯化的病毒抗原。本发明提供了一种纯化效果好、抗原回收率高的病毒抗原纯化新方法，纯化的病毒抗原适合于制备疫苗。

摘要： 本实用新型公开了一种凝胶过滤层析介质制备用抽滤装置，包括抽滤机主体，所述抽滤机主体的左侧活动连接有储料瓶，所述储料瓶的顶部活动安装有层析柱，所述层析柱的外表面固定安装有支撑架，所述层析柱的内部活动安装有辅助组件，所述辅助组件的顶部活动安装有密封塞，所述密封塞的顶部活动安装有漏斗。本实用新型通过设置层析筒用于存放填料，方便使用者更换，减少层析柱使用完毕后需要清理的面积，能更快将层析柱投入使用，提高工作效率，通过设置密封盖，在使用者取出使用完毕后的层析筒时用密封盖将层析筒的底部封住，防止残液流出，通过设置固定块和限位块对放置在层析柱内部的层析筒进行限位，提高连接牢固性和密封性。

摘要： 一种凝胶过滤层析柱自动填料装置，包括层析柱，层析柱下端设有截流开关，层析柱上端设置有漏斗，该漏斗的漏斗颈通过连接管与层析柱上端端口连通；层析柱内从下至上依次填充有缓冲液和基质，该基质液面靠近层析柱上端端口；本实用新型在传统层析柱上设置了漏斗和连接管实现自动填料的功能，结构简单，操作方便；且可有效的避免间断性添加基质时造成的断层和不均匀现象，提高柱层析的分离效果；与市场上的装柱器相比，该实用新型所需耗材低廉、为常规实验耗材，制作简单，可操作性强，能满足普通实验室使用。