铜绿假单胞菌随机扩增多态性DNA分析中反应条件优化方案的探讨

摘要

目的:筛选出反应体系的最佳优化方案及最佳扩增条件,用于铜绿假单胞菌随机扩增多态性DNA分析(RAPD).方法:应用单因素设计和反应曲面设计进行RAPD反应体系的优化,同时比较不同的退火温度、延伸温度及热循环仪类型对RAPD指纹图的影响.结果:单因素设计明显受到多因素间交互作用的影响,从而使优化的反应体系具有多样性;反应曲面设计得出相对稳定的优化反应体系（关键成分浓度）为：Mg2+2.0?mmol/L、引物0.5?μmol/L和模板0.5?ng/μl.退火温度以38～43℃、延伸温度以62～72℃为最佳.结论:反应曲面设计是优化RAPD反应体系的最佳方案.扩增条件中退火和延伸温度分别以38～43℃和62～72℃为最佳.