Smad4诱导大规模染色质伸展结构域定位

摘要

目的:了解Smad4能否调节大规模染色质结构改变并对其功能区域进行定位.方法:将Smad4及其缺失突变体与pRC-lac 载体上lac的阻遏物融合并在AO3-1细胞中表达.该细胞株由CHO细胞衍变而来,整合有256个拷贝串联排列的lac操纵基因.在lac操纵子基因上游含有DHFR基因, 可用甲氨蝶呤(MTX)进行基因共扩增.在细胞中lac阻遏物识别和结合lac操纵子基因.用抗lac阻遏物抗体进行免疫组化试验,荧光显微镜下观察染色质结构的改变.结果:野生型Smad4(1～552 aa)有一定的诱导染色质伸展能力,且不依赖于TGF-β.N端区域(1～150 aa)、中间连接区域(130～325 aa)没有诱导大规模染色质伸展活性.C端区域(260～552 aa)有一定的诱导染色质伸展能力,而C端缺失38个氨基酸残基的区域(260～514 aa)能强烈地诱导大规模染色质伸展.结论:Smad4诱导大规模染色质伸展结构域位于260～514位氨基酸之间,C端38个氨基酸对Smad4诱导大规模染色质伸展有抑制作用.对Smad4诱导大规模染色质伸展活性特性的研究为揭示Smad4在肿瘤发生发展中的作用机制提供了新的途径.