人腱细胞Smad2、Smad4基因MH2结构域的克隆和序列鉴定

摘要

目的从人腱细胞内克隆转化生长因子-β特异的细胞内信号转导基因Smad2、4的功能性结构域-MH2结构域.方法原代培养人腱细胞,从培养的细胞中提取总RNA,逆转录合成单链cDNA;设计引物进行PCR,扩增Smad2、4基因MH2结构域的基因片段,将其定向插入pGEM-T载体,转化大肠杆菌DH5α.挑选阳性克隆并进行核苷酸序列测定分析.结果测序结果与Genebank中克隆的基因序列完全一致.结论从人腱细胞中克隆成功Smad2、4基因的MH2结构域,证实了Smad2、4基因在人腱细胞中的表达;提示人腱细胞内存在SMAD2、4信号转导途径,TGF-β对人腱细胞分化的调节可能是通过SMAD2、4信号转导途径实现的.